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你知道感受態細胞的制作方法嗎?
  感受態細胞主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
 
  制作方法︰
 
  CaCl2法
 
  1.將快速生長的大腸桿菌置于經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸黴解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞
 
  細胞膜通透性發生變化,極易與外源DNA相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸黴的羥基-磷酸鈣復合物。
 
  聯合其它的二價金屬離子(如Mn、Co)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高100~1000倍。
 
  2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
 
  3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
 
  電轉法
 
  電擊法不需要預先誘導細菌的感受態,依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌,轉化率高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便,愈來愈為人們所接受主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。

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